L’amplification
d’un plasmide in vivo se passe par le clonage, selon un processus qui contient
4 étapes : transformation, réplication, sélection, isolement.
Transformation d’un plasmide dans une bactérie n’est pas facile, il existe
plusieurs méthodes pour y arriver. Par exemple, si on travaille avec E. Coli,
on utilise deux méthodes, choc thermique ou électroporation. On suivie par
deuxième étape où on laisse les bactéries à reproduire. Après on
sélectionne les bactéries qui ont acquis le plasmide, en utilisant les
antibiotiques, car le plasmide contient la résistance contre l’antibiotique.
Les organismes qui n’ont pas la résistance meurent. On isole une colonie qu’on
amplifie de nouveau et après la purification on récupère de l’ADN plasmidique pur.
Les cellules eucaryotes
Chez les cellules
eucaryotes c’est plus difficile de réaliser la même expérience, car l’ADN de
plasmides bactérien ne se réplique pas
et ils sont perdus au cours des divisions. Plusieurs méthodes sont développées
pour introduire un ADN exogène dans une cellule, comme inclusion de l’ADN dans
des liposomes, électroporation, microinjection, transduction virale etc.